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如何配置液相色譜流動相
更新時(shí)間:2016-08-30   點(diǎn)擊次數(shù):4238次

A. 液相試劑要求

試劑如甲醇,乙腈必須為色譜級純,其他試劑也盡量使用色譜級純,試劑標(biāo)簽上都會標(biāo)有色譜級或HPLC等字樣。水為超純水或者直接購買質(zhì)量有保證的純凈水。

B. 流動相配置注意事項(xiàng)

一般來說,溶劑的混合按體積比(V/V)或重量比(W/W)進(jìn)行。溶液的體積因溫度而變化,所以按重量比混合配置流動相,樣品測定的重復(fù)性較好,但是操作繁瑣,通常多為體積混合。

體積混合有三種方式,例如50%乙腈水溶液:

方式(1):可以用量筒量取乙腈500ml,再量取水500ml,兩種液體在瓶內(nèi)充分搖晃混合。

方式(2):可以先取500ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。

方式(3):可以先取500ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。

這三種方式配置得到的流動相組成都是不同的,即使不考慮其他方面因素,保留時(shí)間也不會相同。一般情況推薦使用方式(1)來配置流動相。

C. 含緩沖鹽流動相的配制需注意的問題

配置緩沖鹽使用的鹽試劑也盡量使用色譜級純,稱樣要,為了達(dá)到要求,選用合適量程的天平且每天使用前對天平校正。按要求配置好以后必須通過0.45μm或0.22μm濾膜過濾并超聲脫氣20min以上。

注意:緩沖鹽要臨用新配。

D. 何時(shí)調(diào)節(jié)流動相pH值

采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時(shí),通過調(diào)節(jié)流動相的pH值,以抑制樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。

(1)對于弱酸,流動相的pH值越小,組分的k值越大,當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時(shí),弱酸主要以分子形式存在;分析弱酸樣品時(shí),通常在流動相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液。

(2)對于弱堿,情況相反。分析弱堿樣品時(shí),通常在流動相中加入少量弱堿,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

流動相中加入有機(jī)胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的強(qiáng)相互作用,減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機(jī)胺(如三乙胺)又稱為減尾劑或除尾劑。

注意:PH的調(diào)節(jié)不可超出色譜柱的PH耐受范圍。

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